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用途：
液相色譜法只要求樣品能制成溶液
,
不受樣品揮發(fā)性的限制
,
流動相可選擇的范圍寬
,
固定相的種類繁多
,
因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、
離解的和非離解的以及各種分子
量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，
HPL
C
所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定
性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，
能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。
隨著固定相的發(fā)展
,
有
可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于
HPL
C
具有高分辨率、高靈敏
度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用
,
流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)
,
因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食
品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用
是一個重要的發(fā)展方向。
3.
測定原理
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，
樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相
,
被流動相載入色譜柱
(
固定相
)
內(nèi)
,
由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)
,
在兩相中作相對運(yùn)
動時
,
經(jīng)過反復(fù)多次的吸附
-
解吸的分配過程
,
各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別
,
被
分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出
,
通過檢測器時
,
樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄
儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜法用途
液相色譜法只要求樣品能制成溶液, 不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。 與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPL C 所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展, 有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于HPL C具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用, 流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。
液相色譜法測定原理
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動時, 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜法注意事項
1.使用”保護(hù)柱”，能夠延長色譜柱的使用壽命。簡單的說，”保護(hù)柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的”保護(hù)柱”，可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長柱子壽命的效果。如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)。會造成反效果。因為在保護(hù)柱使用過程中。如污染達(dá)到一定程度而沒有及時更換，累積的雜物很可能會沖入色譜柱中，反而會造成色譜柱損壞。因此。使用”保護(hù)柱”時，重要的是要知道什幺時候該換保護(hù)柱。該換的時候就必須要立即更換。
2.選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用方法；可以延長柱子的使用壽命。一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號的柱子之間的品質(zhì)都相同，對品質(zhì)管理很嚴(yán)格的廠家而言，這說法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過后都會產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開發(fā)新分析方法時，許多專家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會改變；如此一來，使用舊柱子開發(fā)出來的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時。發(fā)生無法達(dá)到預(yù)定效果的情況。總的說。開發(fā)新分析方法時要使用品質(zhì)好的新柱子；并且一支柱子好使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長。
3.定期沖洗柱子可以延長柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時間后總會有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)。這些雜質(zhì)不會隨著流動相出來，自然會逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來的分析譜圖上出現(xiàn)。而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡單的解決方法是用較強(qiáng)的流動相沖洗。好是在每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時使用緩沖劑時﹐好用水來取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果不先用有機(jī)和水的混合溶液沖洗，而直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會沉淀出來，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來沖洗基本就足夠了。專家建議好將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實驗程序完畢地后，如此一來每天在開機(jī)前都會用100%機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再沖洗。打算使用反沖洗處理前，好先參考柱子的保養(yǎng)說明書。所以要真正保護(hù)柱子，使柱子的壽命延長，好是使用”保護(hù)柱”和定期沖洗柱子
